Ny anton-javatra fitsabahana ao amin'ny fanehoan-kevitra amin'ny PCR

Mandritra ny fanehoan-kevitry ny PCR, ny sasany miditra an-tsehatra matetika no sendra.
Noho ny fahatsapan-tena avo indrindra amin'ny PRC, ny fandotoana dia heverina ho iray amin'ireo antony lehibe indrindra misy fiantraikany amin'ny valin'ny PCR ary mety hamoaka valiny diso.
Ny valisoa mitovy dia ny loharano isan-karazany izay mitarika valiny ratsy. Raha ny ampahany iray na mihoatra ny ampahany amin'ny fifangaroana PCR na ny fanehoan-kevitra mampivarahontsana dia tsy mihetsika na manelingelina, azo esorina ny Assodists diagnostika. Mety hiteraka fahombiazana izany ary mety hisy vokatra ratsy diso mihitsy aza.
Ankoatry ny fampirantiana, ny fahaverezan'ny tsy fivadihana asidra kendrena kendrena kendrena dia mety hitranga noho ny fandefasana sy / na fitehirizana ny fepetra fitehirizana alohan'ny fanomanana santionany. Ho an'ny tena manokana, ny mari-pana avo na ny fitahirizana tsy ampy dia mety hiteraka fahasimban'ny sela sy ny asidra nokleary. Ny sela sy ny fanamboarana ny sela sy ny fanamboarana paraffin dia matetika no antony mahatonga ny Fragmentation ADN sy ny olana maharitra (jereo ny tarehimarika 1 sy 2). Amin'izany toe-javatra izany, na dia ny fitokana sy ny fanadiovana tsara indrindra aza dia tsy hanampy.

Sary 1 | Vokatry ny immobilization amin'ny tsy fivadihan'ny ADN
Agarose Gel Electrophoresis dia naneho fa ny kalitaon'ny ADN mitoka-monina amin'ny sisin'ny paraffin amin'ny Autopsies dia miovaova be. Ny ADN ny halavan'ny sombintsombiny samy hafa dia nanatrika tao amin'ny efitrano fandraisam-bahiny arakaraka ny fomba fanamboarana. Ny ADN dia notehirizina ihany rehefa raikitra tamin'ny santionany teratany ary tao amin'ny formaline tsy miandany. Ny fampiasana ny fiasa mahery vaika boribory na fanoratana, ary formalin asidra misy endrika tsy misy dikany, ary ny fanao amin'ny alàlan'ny ADD. Ny sisa tavela dia marefo be.
Eo ankavia, ny halavan'ny sombintsombiny dia aseho amin'ny tsiro kilao (kbp)

Sary 2 | Ny fahaverezan'ny tsy fivadihan'ny kendrena asidra nokleary
(a) Ny hantsana 3'-5 'dia hiteraka fiatoana amin'ny ADN kendrena. Ny synthesis ny ADN dia mbola hitranga amin'ny sombintsombiny kely. Na izany aza, raha toa ka tsy hita ao amin'ny Fragment ny ADN ny toerana iray voalohany, dia misy ihany ny fanamafisana tsipika. Amin'ny tranga tena ankasitrahana indrindra, ny sombintsombiny dia mety hifampiresaka, fa ny vokatra dia ho kely sy ambany ny haavon'ny fisavana.
b) Ny fahaverezan'ny basana, indrindra noho ny fanentanana sy ny fanorenanao Dimer Dimer, dia mitarika ny fihenan'ny isan'ny h-bond ary ny fihenan'ny tm. Mandritra ny dingana mafana kokoa, ny primers dia hialà amin'ny ADN Matrix ary tsy hody na dia kely loatra aza.
(c) Manantona ny ankilany manantona ny faladia TT Dimer.
Olana iray hafa mahazatra izay matetika mitranga amin'ny diagnostika molekular dia ny famotsorana ny kendrena tsy misy fotony raha oharina amin'ny fitrandrahana chloroform. Amin'ny toe-javatra tafahoatra, izany dia mety mifandray amin'ny ratsy diso. Ny fotoana be dia be dia be ny famonjen'i lysis na fandevonan-kanina an-tsokosoko amin'ny sela sela, fa ity fomba ity dia matetika miteraka fahatsapana ambany ambany noho ny famotsorana asidra nokleary.

Fampisehoana ny hetsika polymerase mandritra ny amplification

Amin'ny ankapobeny, ny fampiatoana dia ampiasaina ho foto-kevitra ao anaty boaty mba hamaritana ny antony rehetra izay mitarika amin'ny valin'ny Supoptimal Pcr. Amin'ny heviny tsara tarehy, ny fampiatoana dia voafetra amin'ny asan'ny Enzyme, izany hoe, mampihena na manakana ny fiovam-po amin'ny vokatra amin'ny alàlan'ny fifaneraserana amin'ny toerana mavitrika na ny cofactor (ohatra, mg2 + ho an'ny tapa-dna polymerase).
Ny singa ao amin'ny santionany na ny santionany sy ny sombintsombiny dia misy ny reagents dia afaka manakana mivantana ny angovo na mamandrika ireo cofa ao (Eg Edta), ka tsy mivadika ny polymerase ary ny valin'ny PCR diso na diso.
Na izany aza, maro ny fifandraisan'ny singa fanehoan-kevitra sy ny asidra nokleary izay misy asidra nokleary ihany koa dia voatondro ho 'Pcr Inibitors'. Vantany vao ketraka ny fahamarinan'ny sela ary ny asidra nokleary dia navoaka, ny fifaneraserana eo amin'ny santionany sy ny vahaolana manodidina ary ny dingana mafy orina. Ohatra, ny 'scavengers' dia afaka mamatotra ny ADN tokana na roa sosona amin'ny alàlan'ny fifaneraserana tsy an-jatony ary hanelingelina ny fitokana sy ny fanadiovana amin'ny alàlan'ny fampihenana ny isan'ny lasibatra izay mahatratra ny fanehoan-kevitry ny pcr.
Amin'ny ankapobeny, ny fampirantiana Pcr dia misy ny ankamaroan'ny tsiranoka amin'ny vatana ary ny reagents ampiasaina amin'ny fitsapana diagnostika klinika (urrea sy hemoglobin ary ny singa organika, glycogen, gycogen, ca2 +,

Ny fanakorontanana pcr be dia be dia hita ao amin'ny bakteria sy ny sela eukaryotika, ADN tsy kendrena, ADN-mamatotra Macromolecules amin'ny tissue Matrices sy ny fitaovana laboratoatra toy ny fonon-tanana sy ny plastika. Ny fanadiovana asidra nokleary mandritra na aorian'ny fitrandrahana dia ny fomba tiana ho fanesorana ny fanesorana ny pcr.
Ankehitriny, ny fitaovana fanalan-jiro isan-karazany dia afaka manolo ny protocols manual be dia be, fa ny fanarenana 100% sy / na fanadiovana ny lasibatra dia tsy mbola tanteraka. Ny mety hisongadina mety hitranga dia mbola misy eo amin'ny asidra voadio voadio na mety efa nisy. Ny paikady samihafa dia misy hampihena ny fiantraikan'ny inhibitors. Ny safidin'ny polymerase mety dia mety hisy fiantraikany lehibe amin'ny hetsika fampiatoana. Ny fomba voaporofo hafa mba hampihenana ny fampiakarana Pcr dia mitombo ny fifantohana polemrase na fampiharana ny additives toa an'i BSA.
Ny fanehoan-kevitry ny fanehoan-kevitra PCR dia azo aseho amin'ny alàlan'ny fampiasana ny fanaraha-maso ny kalitao anatiny (ipc).
Ny fikarakarana dia tokony horaisina mba hanesorana ny vahaolana rehetra sy ny vahaolana hafa ao anaty kitapo fitrandrahana, toa an'i Ethanol, EDTA, CETAB, LICL, GUSCN, SDS, ISOPROPANOL ary Phenol, avy ao amin'ny Asids Nukleic, dia mitokana amin'ny didy feno fanasana. Miankina amin'ny fifantohan'izy ireo, mety hampihetsika na hanakana ny PCR izy ireo.