Famahana olana amin'ny PCR Analyzer: Fanontaniana sy vahaolana matetika

Ny mpandinika polymerase chain reaction (PCR) dia fitaovana tena ilaina amin'ny biolojia molekiola, ahafahan'ny mpikaroka manamafy ny ADN ho an'ny fampiharana manomboka amin'ny fikarohana fototarazo ka hatramin'ny diagnostika klinika. Na izany aza, toy ny fitaovana saro-pady rehetra, ny mpandinika PCR dia mety hiatrika olana izay misy fiantraikany amin'ny fahombiazany. Ity lahatsoratra ity dia mamaly fanontaniana mahazatra momba nyPCR analyzerfamahana olana ary manome vahaolana azo ampiharina amin'ny olana mahazatra.

1. Nahoana no tsy mitombo ny fanehoan-kevitro PCR?

Ny iray amin'ireo olana mahazatra indrindra atrehin'ny mpampiasa dia ny tsy fahafahan'ny fihetsiky ny PCR hanamafy ny ADN kendrena. Mety ho antony maromaro no mahatonga izany:

Famolavolana voalohany tsy mety: Ataovy azo antoka fa voafaritra manokana amin'ny filaharana kendrena ny primero ary manana mari-pana mitsonika tsara indrindra (Tm). Mampiasà fitaovana rindrambaiko ho an'ny famolavolana primer mba hisorohana ny fatorana tsy voafaritra.

ADN Modely tsy ampy: Hamarino fa mampiasa ADN môdely ampy ianao. Ny kely loatra dia miteraka fahalemena na tsy misy amplification.

Inhibitors ao amin'ny santionany: Ny loto ao amin'ny santionany dia afaka manakana ny fihetsiky ny PCR. Eritrereto ny fanadiovana ny ADN na mampiasa fomba fitrandrahana hafa.

Vahaolana: Jereo ny endrikao voalohany, ampio ny fifantohan'ny môdely, ary ataovy azo antoka fa tsy misy inhibitors ny santionanao.

2. Nahoana no diso habe ny vokatra PCR-ko?

Raha tsy araka ny efa nampoizina ny haben'ny vokatrao PCR, dia mety manondro olana amin'ny toetry ny fanehoan-kevitra na ny akora ampiasaina izany.

Fanamafisana tsy voafaritra: Mety hitranga izany raha mifatotra amin'ny toerana tsy noeritreretina ny primer. Jereo ny maha-tokana ny primers mampiasa fitaovana toy ny BLAST.

Diso ny mari-pana fanariana: Raha ambany loatra ny mari-pana fanariana dia mety hisy fatorana tsy voafaritra. Optimization ny mari-pana annealing amin'ny alalan'ny gradient PCR.

Vahaolana: Hamafiso ny maha-tokana ny primer ary amboary ny mari-pana fanalana mba hanatsarana ny fahamarinan'ny vokatra PCR.

3. Ny mpandinika PCR-ko dia mampiseho hafatra diso. inona no tokony hataoko?

Ny hafatra diso amin'ny mpandinika PCR dia mety mampatahotra, saingy matetika izy ireo dia afaka manome fanazavana momba ny olana mety hitranga.

Olana momba ny calibration: Ataovy azo antoka fa voalamina tsara ny mpandinika PCR. Ny fikojakojana tsy tapaka sy ny fisavana calibration dia tena ilaina mba hahazoana valiny marina.

Vondrona rindrambaiko: Indraindray, mety hiteraka olana ny bibikely rindrambaiko. Avereno indray ny solosainao ary jereo raha misy fanavaozana rindrambaiko.

VAHAOLANA: Jereo ny boky torolalana ho an'ny kaody fahadisoana manokana ary araho ny dingana famahana olana. Misoroka olana maro ny fikojakojana tsy tapaka.

4. Nahoana no tsy mifanaraka ny valin'ny valin'ny PCR?

Ny valin'ny PCR tsy mifanaraka dia mety mahasosotra noho ny antony maro:

Ny kalitaon'ny Reagent: Ataovy azo antoka fa vaovao sy tsara kalitao ny reagents rehetra, anisan'izany ny enzymes, buffers ary dNTPs. Mety hiteraka fiovaovana ny reagents lany daty na voaloto.

Kalibration Thermal Cycler: Mety hisy fiatraikany amin'ny fizotry ny PCR ny firafitry ny mari-pana tsy mifanaraka. Jereo tsy tapaka ny calibration ny thermal cycler.

Vahaolana: Mampiasà réagent avo lenta ary asio calibrate tsy tapaka ny mpitaingina mafana anao mba hahazoana vokatra tsy miovaova.

5. Ahoana no hanatsarana ny fahombiazan'ny PCR?

Ny fanatsarana ny fahombiazan'ny fanehoan-kevitra PCR dia mety hitarika amin'ny vokatra avo kokoa sy vokatra azo antoka kokoa.

Amboary ny toetry ny fanehoan-kevitra: Manaova fanandramana amin'ny alàlan'ny fifantohana samihafa amin'ny primer, ny ADN môdely ary ny MgCl2. Ny fanehoan-kevitry ny PCR tsirairay dia mety mitaky fepetra tokana mba hahazoana fahombiazana tsara indrindra.

Mampiasà anzima tsy mivadika: Raha tena zava-dehibe ny fahitsiana, dia diniho ny fampiasana polymerase ADN tena mahatoky mba hampihenana ny lesoka mandritra ny fanamafisana.

Vahaolana: Manaova fanandramana fanatsarana mba hahitana ny fepetra tsara indrindra ho an'ny fanamboarana PCR manokana.

Raha fintinina

Famahana olana aPCR analyzerMety ho asa sarotra, fa ny fahatakarana ny olana mahazatra sy ny vahaolana amin'izy ireo dia afaka manatsara ny traikefanao amin'ny PCR. Amin'ny famahana ireo olana mahazatra ireo, ny mpikaroka dia afaka manatsara ny valin'ny PCR ary miantoka vokatra azo antoka amin'ny fampiharana biolojia molekiola. Ny fikojakojana tsy tapaka, ny fifantenana amim-pitandremana ny reagents, ary ny fanatsarana ny toe-javatra misy ny fanehoan-kevitra dia fanalahidin'ny fanadihadiana PCR mahomby.