Famahana olana amin'ny PCR Analyzer: Fanontaniana sy vahaolana matetika apetraka

Fitaovana tena ilaina amin'ny biolojia molekiola ny fitaovana famakafakana ny fihetsiky ny rojo polymerase (PCR), ahafahan'ny mpikaroka manamafy ny ADN ho an'ny fampiharana manomboka amin'ny fikarohana fototarazo ka hatramin'ny diagnostika klinika. Na izany aza, toy ny fitaovana sarotra rehetra, ny fitaovana famakafakana PCR dia mety hiatrika olana izay misy fiantraikany amin'ny fahombiazany. Ity lahatsoratra ity dia miresaka fanontaniana mahazatra momba nyMpandinika PCRfamahana olana ary manome vahaolana azo ampiharina amin'ireo olana mahazatra.

1. Nahoana no tsy mitombo ny valin'ny fitiliana PCR nataoko?

Ny iray amin'ireo olana mahazatra indrindra atrehin'ny mpampiasa dia ny tsy fahafahan'ny valin'ny PCR manamafy ny ADN kendrena. Azo lazaina fa misy antony maromaro mahatonga izany:

Tsy mety ny famolavolana "primer": Ataovy azo antoka fa mifanaraka amin'ny filaharan'ny "primer" ny "primer"-nao ary manana mari-pana tsara indrindra amin'ny fandrendrehana (Tm). Ampiasao ny rindrambaiko amin'ny famolavolana "primer" mba hisorohana ny fifamatorana tsy voafaritra tsara.

ADN môdely tsy ampy: Hamarino tsara fa ampy ny ADN môdely ampiasainao. Ny kely loatra dia hiteraka fihenan'ny fanamafisana na tsy fisian'ny fanamafisana.

Ireo zavatra manakana ny fiasan'ny PCR ao amin'ny santionany: Mety hanakana ny fiasan'ny PCR ireo zavatra manimba ao amin'ny santionany. Eritrereto ny fanadiovana ny ADN-nao na mampiasa fomba fitrandrahana hafa.

Vahaolana: Jereo ny endriky ny "primer", ampitomboy ny fifantohana amin'ny môdely, ary ataovy izay hahazoana antoka fa tsy misy zavatra manakana ny fampiasana ny santionany.

2. Nahoana no tsy mety ny haben'ny vokatra PCR-ko?

Raha tsy araka ny nantenaina ny haben'ny vokatra PCR-nao, dia mety hidika izany fa misy olana amin'ny toe-javatra misy ny fihetsika na ny akora ampiasaina.

Fanamafisana tsy manokana: Mety hitranga izany raha miraikitra amin'ny toerana tsy nahy ny primer. Jereo ny maha-manokana ny primer amin'ny fampiasana fitaovana toy ny BLAST.

Tsy mety ny mari-pana amin'ny fanafanana: Raha ambany loatra ny mari-pana amin'ny fanafanana dia mety hiteraka fifamatorana tsy voafaritra tsara. Fanatsarana ny mari-pana amin'ny fanafanana amin'ny alàlan'ny gradient PCR.

Vahaolana: Hamafiso ny maha-manokana ny primer ary hatsarao ny mari-pana amin'ny fanafanana mba hanatsarana ny fahamarinan'ny vokatra PCR.

3. Mampiseho hafatra diso ny PCR analyzer-ko. Inona no tokony hataoko?

Mety hampatahotra ireo hafatra diso amin'ny mpandinika PCR, saingy matetika izy ireo no afaka manome fanazavana momba ireo olana mety hitranga.

Olana amin'ny fanamarinana: Ataovy azo antoka fa voamarina tsara ny PCR analyzer. Tena ilaina ny fikojakojana sy ny fanamarinana tsy tapaka mba hahazoana vokatra marina.

Vondrona Rindrambaiko: Indraindray, mety hiteraka olana ny bibikely amin'ny rindrambaiko. Avereno indray ny solosainao ary jereo raha misy fanavaozana rindrambaiko.

VAHAOLANA: Jereo ny boky torolalana ho an'ny mpampiasa raha mila ny kaody fahadisoana manokana ary araho ny dingana famahana olana atolotra. Ny fikojakojana tsy tapaka dia afaka misoroka olana maro.

4. Nahoana no tsy mitovy ny valin'ny fitiliana PCR nataoko?

Mety ho sarotra ny mahita vokatra tsy mitovy amin'ny PCR noho ny antony maro:

Kalitaon'ny Reagent: Ataovy azo antoka fa vaovao sy avo lenta ny reagent rehetra, anisan'izany ny anzima, ny buffer, ary ny dNTP. Mety hiteraka fiovaovana ny reagent efa lany daty na voaloto.

Fanitsiana ny mari-pana amin'ny alalan'ny "thermal cycler": Mety hisy fiantraikany amin'ny fizotran'ny PCR ny tsy fitoviana eo amin'ny mari-pana. Jereo tsy tapaka ny fanitsiana ny "thermal cycler".

Vahaolana: Mampiasà reagents avo lenta ary amboary tsy tapaka ny fitaovana fandrefesana hafanana mba hahazoana vokatra mitovy.

5. Ahoana no hanatsarana ny fahombiazan'ny valin'ny PCR?

Ny fanatsarana ny fahombiazan'ny valin'ny fitiliana PCR dia mety hitarika vokatra ambony kokoa sy vokatra azo antoka kokoa.

Atsarao ny fepetran'ny fihetsehana: Andramo amin'ny fampiasana fifantohana samihafa amin'ny primer, ADN môdely ary MgCl2. Ny fihetsehana PCR tsirairay dia mety mitaky fepetra miavaka mba hahazoana fahombiazana tsara indrindra.

Mampiasà anzima avo lenta: Raha tena ilaina ny fahamarinan-toerana, dia diniho ny fampiasana ADN polymerase avo lenta mba hampihenana ny lesoka mandritra ny fanamafisana.

Vahaolana: Manaova andrana fanatsarana mba hahitana ny fepetra tsara indrindra ho an'ny fametrahana PCR manokana anao.

Raha fintinina

Famahana olana amin'nyMpandinika PCRMety ho asa sarotra izany, saingy ny fahatakarana ireo olana mahazatra sy ny vahaolana amin'izany dia afaka manatsara be ny traikefanao amin'ny PCR. Amin'ny famahana ireo olana mahazatra ireo, dia afaka manatsara ny valin'ny PCR ireo mpikaroka ary miantoka ny valiny azo antoka amin'ny fampiharana biolojia molekiola. Ny fikojakojana tsy tapaka, ny fisafidianana tsara ny reagents, ary ny fanatsarana ny fepetra momba ny fihetsika no fanalahidin'ny fanadihadiana PCR mahomby.