Torolàlana momba ny Siansa amin'ny Fahavaratra: Rehefa mihaona amin'ny andrana molekiola ny onjan-kafanana 40°C

Mbola mitohy ny mari-pana avo dia avo manerana an'i Shina tato ho ato. Tamin'ny 24 Jolay, namoaka fanairana momba ny mari-pana avo dia avo ny Shandong Provincial Meteorological Observatory, izay maminavina mari-pana "toy ny sauna" eo amin'ny 35-37°C (111-133°F) sy hamandoana 80% mandritra ny efatra andro manaraka any amin'ny faritra afovoan-tany. Manakaiky ny 48°C (111-133°F) ny mari-pana any amin'ny toerana toa an'i Turpan, Xinjiang. Eo ambanin'ny fanairana volomboasary i Wuhan sy Xiaogan, Hubei, miaraka amin'ny mari-pana mihoatra ny 37°C any amin'ny faritra sasany. Amin'ity hafanana mando ity, ny tontolo bitika ao ambanin'ny pipette dia miaina fikorontanana tsy mahazatra - ny fahamarinan'ny asidra nokleika, ny asan'ny anzima, ary ny toetry ny reagents dia samy voakorontana mangina noho ny onjan-kafanana.

Lasa fifaninanana miady amin'ny fotoana ny fitrandrahana asidra nokleika. Rehefa mihoatra ny 40°C ny mari-pana any ivelany, na dia mirehitra aza ny fampangatsiahana rivotra, dia matetika mihoatra ny 28°C ny mari-pana ao amin'ny latabatra fandidiana. Amin'izao fotoana izao, ny santionan'ny ARN avela eny an-kalamanjana dia mihasimba avo roa heny noho ny amin'ny lohataona sy ny fararano. Amin'ny fitrandrahana vakana magnetika, dia tototry ny rano ny vahaolana buffer noho ny fiovaovan'ny solvent haingana, ary mora mivaingana ny kristaly. Ireo kristaly ireo dia hiteraka fiovaovana lehibe amin'ny fahombiazan'ny fisamborana asidra nokleika. Mitombo miaraka amin'izay ny fiovaovan'ny solvent organika. Amin'ny 30°C, mitombo 40% ny habetsahan'ny fiovaovan'ny chloroform raha oharina amin'ny 25°C. Mandritra ny fampiasana, ilaina ny miantoka fa 0.5m/s ny hafainganam-pandehan'ny rivotra ao amin'ny hood setroka, ary mampiasa fonon-tanana nitrile mba hitazonana ny fahombiazan'ny fiarovana.

Miatrika fikorontanan'ny mari-pana sarotra kokoa aza ireo andrana PCR. Ireo "réagent" toy ny anzima Taq sy ny "reverse transcriptase" dia tena mora tohina amin'ny fiovaovan'ny mari-pana tampoka. Ny "condensation" eo amin'ny rindrin'ny fantsona rehefa esorina amin'ny vata fampangatsiahana -20°C dia mety hiteraka fahaverezan'ny asan'ny anzima mihoatra ny 15% raha miditra ao amin'ny rafitra fanehoan-kevitra. Ny vahaolana dNTP koa dia mety hampiseho fahasimbana azo tsapain-tanana rehefa afaka 5 minitra monja amin'ny mari-pana ao amin'ny efitrano (>30°C). Voasakana ihany koa ny fiasan'ny fitaovana noho ny mari-pana avo. Rehefa mihoatra ny 35°C ny mari-pana manodidina ny laboratoara ary tsy ampy ny elanelan'ny fitaovana PCR amin'ny fanariana hafanana (<50 cm miala ny rindrina), dia mety hahatratra 0.8°C ny fahasamihafan'ny mari-pana anatiny. Io fiviliana io dia mety hiteraka fihenan'ny fahombiazan'ny fanamafisana eo amin'ny sisin'ny takelaka 96-lavaka mihoatra ny 40%. Tokony hodiovina tsy tapaka ny sivana vovoka (ny fitomboan'ny vovoka dia mampihena ny fahombiazan'ny fanariana hafanana hatramin'ny 50%), ary tokony hohalavirina ny fampangatsiahana rivotra mivantana. Ankoatra izany, rehefa manao andrana PCR mandritra ny alina, dia aza ampiasaina ho "vata fampangatsiahana vonjimaika" hitehirizana santionany ny fitaovana PCR. Ny fitahirizana amin'ny 4°C mandritra ny mihoatra ny 2 ora dia mety hiteraka etona miangona rehefa avy mihidy ny sarony mafana, ka hampihena ny fiasan'ny rafitra fihetsiketsehana ary mety hanimba ny môdely metaly an'ilay fitaovana.

Tokony hampaneno fanairana ihany koa ireo laboratoara molekiola rehefa misy fampitandremana momba ny mari-pana ambony tsy tapaka. Tokony hotehirizina ao ambadiky ny vata fampangatsiahana -80°C ny santionan'ny ARN sarobidy, ary ferana amin'ny fotoana mafana be. Ny fanokafana ny varavaran'ny vata fampangatsiahana -20°C mihoatra ny in-dimy isan'andro dia hampitombo ny fiovaovan'ny mari-pana. Ny fitaovana mpamokatra hafanana be dia mitaky toerana fanariana hafanana farafahakeliny 50 sm amin'ny andaniny roa sy ny ankilany aoriana. Ankoatra izany, asaina handamina indray ny fandaharam-potoanan'ny fanandramana: 7:00-10:00 maraina ho an'ny asa saro-pady amin'ny mari-pana toy ny fitrandrahana ARN sy ny famenoana qPCR; 1:00-4:00 hariva ho an'ny asa tsy fanandramana toy ny famakafakana angon-drakitra. Ity paikady ity dia afaka misoroka tsara ny fiakaran'ny mari-pana ambony tsy hanelingelina ireo dingana manan-danja.

Fitsapana ny teknika sy ny faharetana ny fanandramana molekiola mandritra ny hafanana be. Eo ambanin'ny masoandro tsy mety ritra amin'ny fahavaratra, angamba tonga ny fotoana hametrahana ny pipette-nao ary hanampiana boaty ranomandry fanampiny amin'ny santionany mba ahafahan'ny fitaovana mamoaka hafanana bebe kokoa. Io fanajana ny fiovaovan'ny mari-pana io no toetra sarobidy indrindra amin'ny laboratoara mandritra ny volana mafana — rehefa dinihina tokoa, amin'ny hafanana 40°C amin'ny fahavaratra, na dia ny molekiola aza dia mila "faritra tendrony artifisialy" voaaro tsara.